實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：小鼠纖維肉瘤細(xì)胞
來源：纖維肉瘤；C57BL/6J

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：貼壁

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
西藏棱子芹（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Valine肺癌相關(guān)蛋白8抗體包裝1g

西河柳（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Isoleucine型肝炎病NS5A抗體包裝25g

西紅花（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Isoleucine組蛋白H2AX抗體包裝5g

西紅花苷II（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Threonine同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子HESX1抗體包裝1g

西紅花苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Threonine同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子HESX1抗體包裝1g

西青果（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Phenylalanine同源盒蛋白HOX13抗體包裝250mg

西瑞香素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Asparagine Monohydrate同源盒轉(zhuǎn)錄因子8抗體包裝5g

西洋參（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Methionine人絨毛膜促性腺β亞基單抗包裝1g

菥蓂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Methionine人類狀瘤病18 E6抗體包裝100g

溪黃草(線紋香茶菜）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Cystine人類狀瘤病16-E7抗體包裝25g

豨薟草（豨薟）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Cystine hydrochloride核基質(zhì)p84蛋白抗體包裝5g

洗碗葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Cysteine組蛋白H3樣抗體包裝5g

喜馬拉雅紫**（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Cysteine組蛋白H3樣抗體包裝25g

喜樹堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Cysteine hydrochloride monohydrate聚組氨酸抗體標(biāo)簽抗體包裝5g

細(xì)辛（北細(xì)辛）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Cysteine 艾滋病病抗體包裝1g
MC57G細(xì)胞土曲霉Human ADAMTS7(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7) ELISA KitAlias: ADAMTS7(ADisintegrinAndMetalloproteinaseWithThrombospondin7)|COMPaseELISAKitReactivity: Human

糙皮側(cè)耳Human EDA(Ectodysplasin-A) ELISA KitAlias: EDA(Ectodysplasin-A)|EDAproteinhomolog|Tabbyprotein|ED1|HED|EDA1|EDA2|HED1|ODT1|XHED|ECTD1|XLHED|ED1-A1|ED1-A2|EDA-A1|EDA-A2|STHAGX1|EctodermaldysplasiaproteinELISAKitReactivity: Human

尼阿布芽孢桿菌Human TNC(Tenascin) ELISA KitAlias: TNC(TenascinC)|Tenascin|JI|Hexabrachion|Glioma-associated-extracellularmatrixantigen|GP150-225|Neuronectin|Myotendinousantigen|Cytotactin|GMEM|HXB|TenascinJ1|Cytotactin|Glioma-associated-extracellularmatrixantigen|Hexabrachion|hexabrachion(tenascin)|HXBcytotactin|TN-C|TNGPELISAKitReactivity: Human

普通變形桿菌Human IL36A(Interleukin-36 alpha) ELISA KitAlias: IL36A(Interleukin-36alpha)|FIL1epsilon|IL-1E|IL1F6|FIL1|FIL1epsilon|FIL1(EPSILON)|FIL1E|IL-1epsilon|IL1(EPSILON)|IL1E|IL1F6|IL-1F6|IL-1F6(FIL-1-epsilon)|interleukin1family|member6(epsilon)|interleukin1|epsilon|Interleukin36|Alpha|Interleukin-1epsilon|interleukin-1familymember6|Interleukin-36AlphaELISAKitReactivity: Human

橙鱗傘2Human HPX(Hemopexin) ELISA KitAlias: HPX(Hemopexin)|Beta-1B-glycoprotein|beta-1B-glycoprotein||hemopexin|HXELISAKitReactivity: Human

北里胞菌Human MAPT(Microtubule-associated protein tau) ELISA KitAlias: MAPT(Microtubule-associatedproteintau)|TAU|MSTD|PPND|DDPAC|MAPTL|MTBT1|MTBT2|FTDP-17|Neurofibrillarytangleprotein|Pairedhelicalfilament-tauELISAKitReactivity: Human

羊無漿體（青海海宴株）Human TLR5(Toll-like receptor 5) ELISA KitAlias: TLR5(Toll-likereceptor5)|TIL3|SLEB1|Toll|interleukin-1receptor-likeprotein3|TIL-3|TIL3Toll|interleukin-1receptor-likeprotein3|toll-likereceptor5ELISAKitReactivity: Human

鮑姆針層孔菌Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) ELISA KitAlias: PRKACB(cAMP-dependentproteinkinasecatalyticsubunitbeta)ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。