實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
貨號
OVCA433細(xì)胞
詳見說明書
FS-X5397
產(chǎn)品名稱：卵巢癌細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640
狀態(tài)：貼壁
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
頭花蓼（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Adenine hydrochlorideFas相互作用蛋白激酶3抗體包裝25g
透骨香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Inosine人類皰疹病8抗體包裝5g
土貝母苷英文名稱： Inosine磷酸化熱休克蛋白27抗體包裝25g
土貝母苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 5'-AMP-Na2人類皰疹病8抗體包裝5g
土貝母苷乙英文名稱： 5'-AMP-Na2人類皰疹病8抗體包裝25g
土鱉蟲(地鱉)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 5-Bromo-2-deoxyuridine雌下調(diào)基因1蛋白抗體包裝5g
土鱉蟲（冀地鱉）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Cytidine轉(zhuǎn)錄因子HEY2蛋白抗體包裝1g
土大黃（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Cytidine肺癌相關(guān)蛋白Y抗體包裝250mg
土大黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 2'-Deoxyadenosine 5'-triphosphate disodium salt心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白1抗體包裝5g
土茯苓（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 2'-Deoxyguanosine 5'-triphosphate trisodium salt 己糖激酶2抗體包裝100g
土槿皮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 2'-Deoxycytidine 5'-triphosphate disodium salt 熱休克蛋白90α/HSP90 α抗體包裝25g
土荊芥（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 2'-deoxythymidine-5'-triphosphate (dTTP),3sodium salt, dihydrate血紅蛋白β抗體包裝5g
土荊皮(松)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 2'-Deoxyuridine透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2抗體包裝100mg
土荊皮酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Thymidine 透明質(zhì)酸及粘蛋白2抗體包裝1g
Human MEFV(Pyrin) ELISA KitAlias: MEFV|MEF|MarenostrinELISAKitReactivity: Human
高盧蜜環(huán)菌Human UCP1(Mitochondrial brown fat uncoupling protein 1) ELISA KitAlias: UCP1(Mitochondrialbrownfatuncouplingprotein1)|Solutecarrierfamily25member7|Thermogenin|UCP1|UCP|uncouplingprotein1(mitochondrial|protoncarrier)|Thermogenin|SLC25A7mitochondrialbrownfatuncouplingprotein1ELISAKitReactivity: Human
球孢白僵菌Human UCP2(Mitochondrial uncoupling protein 2) ELISA KitAlias: UCP2(Mitochondrialuncouplingprotein2)|UCPH|uncouplingprotein2|Solutecarrierfamily25member8|uncouplingprotein2(mitochondrial|protoncarrier)ELISAKitReactivity: Human
發(fā)酵成對桿菌Human COQ10B(Coenzyme Q-binding protein COQ10 homolog B, mitochondrial) ELISA KitAlias: Coq10bELISAKitReactivity: Human
節(jié)桿菌Human LRP1(Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1) ELISA KitAlias: LRP1(Prolow-densitylipoproteinreceptor-relatedprotein1)|LRP-1|Alpha-2-macroglobulinreceptor|A2MR|ApolipoproteinEreceptor|APOER|CD91ELISAKitReactivity: Human
睪丸酮叢毛單胞菌Human LRP1(Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1) ELISA KitAlias: LRP1(Prolow-densitylipoproteinreceptor-relatedprotein1)|LRP-1|Alpha-2-macroglobulinreceptor|A2MR|ApolipoproteinEreceptor|APOER|CD91ELISAKitReactivity: Human
香氣紅冬孢鎖擲孢酵母Human MEFV(Pyrin) ELISA KitAlias: MEFV|MEF|MarenostrinELISAKitReactivity: Human
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、50ml離心筒2個(gè)
來源：卵巢癌；女性
酮麝香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Guanine SulfateFas相互作用蛋白激酶2抗體包裝5g
OVCA433細(xì)胞鹽古桿菌Human ADAMTS5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5) ELISA KitAlias: ADAMTS5(Adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs5)|ADAMTS11|ADMP-2|Aggrecanase2|Adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs11|adisintegrin-likeandmetalloprotease(reprolysintype)withthrombospondintype1motif|5(aggrecanase-2)|ADAMmetallopeptidasewiththrombospondintype1motif|5|ADAM-TS11|ADAM-TS5|ADAMTS-11|ADAM-TS5|ADAMTS-5|ADMP2|ADMP-2Adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs5|Aggrecanase-2|aggrecanase-2|disintegrin-likeandmetalloproteasewiththrombospondintype1motifELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：