實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

形態(tài)特性：成纖維母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS（gibco）

傳代方法:1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
4-氟-2-三氟 99%GLUT3(Human Glucose transporter 3) ELISA Kit  人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3兔硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氟-5-三氟 98%RBP(Human Retinol binding protein) ELISA Kit  人視黃結(jié)合蛋白兔轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-氟-5-三氟 97%8-OHdG(Human hydroxylysine) ELISA Kit  人8羥脫氧鳥苷兔復(fù)制蛋白A(RPA-70)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-氟-3-三氟 99%Hyl(Human hydroxylysine) ELISA Kit  人羥賴氨兔肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氟三氟 99%GAP(Human GTPase activating protein) ELISA Kit  人GTP酶活化蛋白兔二酯酶4D(PDE4D)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-氟三氟 98%Apo-H(Human Apolipoprotein H) ELISA Kit  人載脂蛋白H兔凋亡蛋白酶激活因子1(APAF-1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

2-氟-4- 98%GPI(Human glycophosphatidylinositol) ELISA Kit  人糖脂酰肌兔α半糖抗原(Gal)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氟-3-PWM(Human pokeweed mitogen) ELISA Kit  人美洲商陸素兔S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氟-4- 98%LPS(Human Lipopolysaccharides) ELISA Kit  人脂多糖/內(nèi)素兔S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氟-5- 99%Human preptin ELISA Kit  人preptin兔胸腺質(zhì)**素(TSLP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-氟-5- 98%PPAR- Alpha(Human peroxisome proliferators activator receptors alpha) ELISA Kit  人過氧化物酶體增殖物激活受體α兔肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SPB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-氟-2- 99%Apo-E(Human Apolipoprotein E) ELISA Kit  人載脂蛋白E兔堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF/FGF2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-氟-4- 98% OGP(Human Osteogenic Growth Peptide) ELISA Kit  人成骨生長(zhǎng)肽兔性成纖維生長(zhǎng)因子(AFGF/FGF1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-氟-5- 97%ODF(Human osteoclast differentiation factor) ELISA Kit  人破骨分化因子兔集落激因子(CSF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-氟-3- 98%OH-PYD(Human Hydroxy-Pyridinium crosslinks) ELISA Kit  人羥膠原吡啶交聯(lián)兔生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6(Gas6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
雞胚胎成纖維細(xì)胞；UMNSAH/DF-1血管**素樣蛋白6Elisa試劑盒Cy3標(biāo)記的羊抗大鼠IgGPCDHGA1  原鈣粘蛋白γA1抗體

Argonaut-1蛋白Elisa試劑盒Cy5標(biāo)記的羊抗大鼠IgGPCDHB7  原鈣粘蛋白β7抗體

水通道蛋白8Elisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的羊抗大鼠IgGPCDHB5  原鈣粘蛋白β5抗體

化乙酰輔酶AElisa試劑盒Cy7標(biāo)記的羊抗大鼠IgGPCDHB4  原鈣粘蛋白β4抗體

化乙酰輔酶A羧化酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗大鼠IgGPCDHB3  原鈣粘蛋白β3抗體

酪氨羥化酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗大鼠IgGPCDHB2  原鈣粘蛋白β2抗體

NEL樣蛋白2Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGPCDHB16  原鈣粘蛋白16抗體

Ⅲ型前膠原Elisa試劑盒生物素標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGPCDHB15/PCDHB22  原鈣粘蛋白15抗體

CA16-IgGElisa試劑盒Cy5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGPCDHB13  原鈣粘蛋白13抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。