實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。 

BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒1-甲基吡唑-4-酸頻哪酯 97%4-三氟甲氧基苯 99%天狼猩紅

Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)ELISA試劑盒5-甲基吡啶-3-酸 98%芐基酮 98%DL-2氨基丁酸(>98.5%,BR)

Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒2-甲氧基吡啶-3-酸頻哪酯 97%氧化鉿(IV)  99.99% metals basisDL-2-羧酸(>98%，BR)

A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)ELISA試劑盒2-甲氧基吡啶-5-酸頻哪酯 97%  Standard for GCDL-苯甘氨酸(>98%，BC)

A組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)ELISA試劑盒1-BOC-吡咯-3-酸 98%溶液 AR，30-33 wt. % in absolute ethanolDL-beta-苯氨酸(>98%，BR)

A激酶PRKA錨定蛋白12(Akap12)ELISA試劑盒3-酸 97%溶液 CP，30-33 wt. % in absolute ethanolDL-肉堿鹽酸鹽

AT豐富結(jié)合域1A(ARID1A)ELISA試劑盒2-基-5-降烯 98%2-氨基-2-甲基-1- 97%DL-鳥氨酸鹽酸鹽(>98%，BC)

ATP酶(ATP)ELISA試劑盒嘧啶-5-酸 98%碳酸氫 AR,99.5% DL-(>99%,BP)

Apelin12(AP12)ELISA試劑盒吡啶-4-酸 94%無水碳酸 AR，99%甲基烯酸二甲氨乙酯(>99%,BR)

Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒嘧啶-5-酸頻哪酯 97%無水碳酸 GR，99.5%D-蘋果酸(>98%，BR)

apelin 13(AP13)ELISA試劑盒2-(三氟甲氧基)苯酸 97%無水碳酸 PTDMS

apelin 12(AP12)ELISA試劑盒2,4,6-三酸 98% 無水碳酸 SPD-正亮氨酸(>99%,BC)

AP-5復合物β亞基(PP1030)ELISA試劑盒異辛酸 GCS,≥99.5% (GC)無水碳酸 99.99% metals basis鹽酸多巴

Alpha-D 酚/維生素E(Alpha-D TPL)ELISA試劑盒異辛酸 CP,98.0%無水碳酸 99.995% metals basisDST

Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒異辛酸  >99.0% (GC)無水碳酸 ACS, ≥99.0% 2'-脫氧尿苷-5'-三磷酸三鈉鹽

AFG3樣蛋白2(AFG3L2)ELISA試劑盒2-溴異丁酰溴 98%硝酸 AR,99.0%四氫甲基嘧啶羧酸(>98%，BR)
大鼠真皮毛**細胞鏈霉菌

種屬: Streptomyces│sp.

分離基物: 土壤

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 0012

生長條件: 28℃

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌

種屬: Yersinia│enterocolitica

提供形式: 凍干物

**等級: 2

模式菌株: no

應用領(lǐng)域: 血清學分群(型)　20

培養(yǎng)基: CM0116

生長條件: 37℃
培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。