實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

蛋白激酶C beta II(PKC-bII)ELISA試劑盒DL-苦杏仁酸 AR,99.0%氫二鈉 AR（劇品）氯吡脲；氯吡苯脲；吡效隆

蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒氫化 98%三乙酯 99%醋酸鎂四水(分子生物學(xué)級(jí))

蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒焦亞硫酸 CP，94.0%氟化，無水 電子級(jí)，粉末磷酸二氫鈉一水(ACS級(jí))

蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP 9.5)ELISA試劑盒1,10-菲羅啉(無水) 99%1,1,1,2-四氟乙烷 99.95%葡萄糖酸鈣

蛋白二硫化物異構(gòu)酶前體(PDI)ELISA試劑盒三聚磷酸鈉 AR,98%三 AR,99.0%乙二四乙酸四鈉鹽二水

蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒錫酸鈉 AR,55.3% SnO2甲基烯酸三氟乙酯 包含 100 ppm MEHQ 穩(wěn)定劑,98%十二烷基-β-D-麥芽糖苷;月桂?；溠刻擒?/span>

蛋白Z(Protein Z)ELISA試劑盒亞硫酸 AR2,2,2-三氟乙 99.5%鹽酸氨基脲

蛋白S(ProteinS)ELISA試劑盒單寧酸 AR大黃素 ≥90% (HPLC)硫酸鏈霉素溶液，30 mg/ml

蛋白S(Protein S)ELISA試劑盒3,4,5-氧基苯甲酸 99%石杉?jí)A甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品乙酰

蛋白C(ProteinC)ELISA試劑盒硫脲 ACS, ≥99.0%石杉?jí)A甲 99%1,3-雙(三羥甲基)甲基氨基烷

蛋白C(Protein C)ELISA試劑盒硝酸氧鋯 水合物 AR,99.5%和厚樸酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品萘乙酰(AR)

蛋白C(PC)ELISA試劑盒二氧化鋯 AR,99.0%楊梅素 97%氫氧化鋇八水

蛋白ATP1B4(ATP1B4)ELISA試劑盒氫氧化鋯 97%楊梅素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%鐵屑(>98%，BC)

蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu)酶)NIMA結(jié)合1(PIN1)ELISA試劑盒硝酸氧鋯 99%厚樸酚  ≥98% (HPLC)檸檬酸鐵(>98%，BR)

蛋白 DJ-1(PARK7)ELISA試劑盒氯化鋯 98%楊梅苷 98%無水亞硫酸鈉(>98%，BC)

彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒堿式碳酸鋯(IV) ≥40% ZrO2 basis葛根素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%DL-乳酸(85~90%，BR)
WRL58細(xì)胞香菇

種屬: Lentinula│edodes

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 食用菌

培養(yǎng)基: 0017

生長條件: 25℃

巨大芽孢桿菌

種屬: Bacillus│megaterium

分離基物: 土壤

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 0033

生長條件: 37℃
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。