冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)ELISA試劑盒2,4-二甲基-1- 99%長春質(zhì)堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%孔雀綠

蛋白酶激活復(fù)合體亞基2(PSME2)ELISA試劑盒3,4-二 99%三氧化鉬 99.95%聚乙二2000

蛋白酶3特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒4-硝基鄰二甲苯 99%三氧化鉬 99.95%，100nm硫代氨基脲(AR)

蛋白酶3抗體(PR3Ab)ELISA試劑盒3-硝基鄰二甲苯 99%二硫化鉬 AR,99%氯化亞鐵四水(AR)

蛋白酶3(PR3)ELISA試劑盒草酸高鐵銨 98%鉬粉 99.5% metals basis，2μm烏來糖;氨酸乙酯

蛋白磷酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)ELISA試劑盒硫酸亞鐵銨，六水 AR，99.5%砷  99.995% metals basis鉬酸

蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒硫酸高鐵銨,十二水 AR，99.0%砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度范圍:0.444(mg/L) ±0.028mg/L酮酸激酶

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)ELISA試劑盒乙基纖維素 電子級對氨基苯胂酸 98%甲磺酸依普羅沙坦;依普沙坦

蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒鞣花酸 96%對氨基苯胂酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸苯甲脒

蛋白酪氨酸激酶(PTK/CD115)ELISA試劑盒沒食子酸乙酯 98%三氧 AR（劇品）氯化鉻;三氯化鉻

蛋白酪氨酸激酶(PTK)ELISA試劑盒熒光素 IND三氧 CP（劇品）肌酸一水

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒檸檬酸鐵 AR三氧 PT（劇品）右旋糖苷/葡聚糖10

蛋白聚糖(PG)ELISA試劑盒檸檬酸鐵 培養(yǎng)級三氧 99.99%（劇品）三(羥甲基)氨烷乙酸鹽

蛋白精氨酸脫亞氨酶4(PADI4)ELISA試劑盒硫酸鐵 AR，F(xiàn)e 21-23 % 98%（劇品）檸檬酸鐵銨

蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(PRMT1)ELISA試劑盒硫酸亞鐵，七水 ACS, ≥99.0%亞鈉 99.99%（劇品）氯化膽堿

蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒石蕊 AR亞鈉 CP（劇品）D-葡萄糖酸內(nèi)酯
WERI-RB-1細(xì)胞表皮葡萄球菌

種屬: Staphylococcus│epidermidis

提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物；凍結(jié)物

**等級: 2

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 致病菌芯片**

培養(yǎng)基: 2

生長條件: 37℃

直立共養(yǎng)單胞菌

種屬: Syntrophomonas│erecta

分離基物: 顆粒污泥

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株

培養(yǎng)基: 989