實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒D-精氨酸鹽酸鹽  98%銀杏內(nèi)酯 A 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%低熔點(diǎn)瓊脂糖；具有低凝膠溫度的瓊脂糖

鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒β-氨酸甲酯鹽酸鹽 99%染料木苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%無(wú)水磷酸二氫

鈣聯(lián)蛋白(calnexin)ELISA試劑盒β-氨酸 99%染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)6-芐氨基嘌呤

鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒D-天冬氨酸 98%吉馬酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%純水(HPLC grade)

鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒N-乙酰-D-亮氨酸 99%龍膽苦苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%馬來(lái)酸,順二酸

鈣激活中性蛋白酶6(CAPN6)ELISA試劑盒D-氨酸 98%銀杏內(nèi)酯 J  分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%硫酸銨

鈣激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA試劑盒D-精氨酸 98%銀杏酸(C15:1) 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%氯化銫

鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)ELISA試劑盒D-天冬酰,一水 99%銀杏酸(C13:0) 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98% 磷酸氫二鈉七水

鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒D-a-氨基己二酸 97%分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥95%dATP溶液(100 mM)

鈣蛋白酶2(M/II)大亞基(CAPN2)(CAPN2)ELISA試劑盒N-乙酰-D-酪氨酸 BR石杉?jí)A乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%癸酸鈉

鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA試劑盒DL-a-氨基己二酸 96%鹽酸去氫駱駝蓬堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)

富組蛋白(HTN5)ELISA試劑盒DL-半胱氨酸鹽酸鹽,一水 98%異鼠李素 90%瓊脂糖(美侖電泳級(jí))

富組蛋白(histatin-5)ELISA試劑盒DL-胱氨酸鹽酸鹽 98%異鼠李素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%（HPLC)Bis-Tris；雙(2-羥乙基)氨基(三羥甲基)

富組氨酸糖蛋白(HRG)ELISA試劑盒DL-胱氨酸 98%異鼠李素 >98%（HPLC)瓊脂糖(Sigma)

富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA試劑盒D-胱氨酸 98%歐前胡素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%植物血凝素

富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61/CCN1)ELISA試劑盒D-環(huán)絲氨酸 98%異阿魏酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%50% 戊二溶液
T98G 細(xì)胞谷氨酸棒桿菌

種屬: Corynebacterium│glutamicum

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)L-色氨酸。

培養(yǎng)基: CM0002

生長(zhǎng)條件: 28℃

意大利游動(dòng)放線菌

種屬: Actinoplanes│italicus

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: Type strain;

培養(yǎng)基: 0011

生長(zhǎng)條件: 28℃
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。